Kai kurių b grupės vitaminų nustatymas didelio slėgio skysčių dss chromatografija
5 (100%) 1 vote

Kai kurių b grupės vitaminų nustatymas didelio slėgio skysčių dss chromatografija

KAI KURIŲ B GRUPĖS VITAMINŲ NUSTATYMAS DIDELIO SLĖGIO SKYSČIŲ (DSS) CHROMATOGRAFIJA.

DSS chromatografija nuo klasikinės skysčių chromatografijos tuo, kad judri fazė paduodama į kolonėlę iš išorinio rezervuaro didelio slėgio siurbliais, naudojamos plieninės kelių milimetrų skersmens kolonėlės, smulki nejudrioji fazė (3 – 10m) [1]. DSS naudojama nelakiems, stipriai poliariems, didelės molėkulinės masės, termolabiliems ir nestabiliems junginiams analizuoti. Pagrindiniai šios analizės privalumai:

1. didelis chromatografinis efektyvumas,

2. trumpas analizės laikas,

3. didelis jautrumas nustatant ir atskiriant labai mažų koncentracijų komponentus.

Šie privalumai paskatino pritaikyti DSS chromatografiją ir B grupės vitaminų analizei. Vitaminams nustatyti naudojamos jonų mainų ir jon-porinė atvirkščių fazių chromatografijos. Literatūroje [2] pateikiamos metodikos atskirai kiekvienam vitaminui nustatyti, bet jos turi daug bendrų bruožų: bandinys ruošiamas atliekant silpnai rūgštinę (0,1N HCl) ir/ar fermentinę hidrolizę (papainas), judri fazė sudaryta iš acetonitrilo (ar metanolio), naudojamos atvirkščių fazių chromatografinės kolonėlės C18 , C8 ir kt. Tačiau kiekvieno vitamino nustatymas turi savo ypatybių, kurias sąlygoja vitamino savybės (pvz. B1 amino grupė linkusi prisijungti prie sorbcinės medžiagos (silanolio) jungčių, dėl ko pailgėja sulaikymo kolonėlėje laikas. B2 sulaikymo laikas labai priklauso nuo judrios fazės pH).

Yra sukurti metodai ir kompleksiniam vitaminų B1, B2 ir B6 nustatymui. Literatūroje [3] pateikta kiekybinės šių vitaminų analizės kūdikių maiste metodas. Bandinys ekstrahuojamas perchloratorūgštimi, vidinis standartas m – benzenkarboksi rūgštis, judrios fazės sudėtis: vanduo, acetonitrilas, natrio heksanosulfatas.

AB “Endokrininiai preparatai”, kur buvo atliekamas tyriamasis darbas gaminamo vitaminų B komplekso kokybei įvertinti pradėto naudoti pagal Britanijos Farmakopėją, paruošta metodika kompleksiniam vitaminų B1, B2, B6 kiekybiniam nustatymui. Atliekama atvirkštinių fazių jon-porinė chromatografija, vidinis standartas – kofeinas, judri fazė sudaryta iš vandens, acetonitrilo, natrio heksanosulfanato ir natrio dihidrofosfato (pH= 2,78). Naudojama atvirkštinių fazių kolonėlė C18, eliucija gradientinė (greitis 2ml/min), detekcija atliekama UV detektoriumi 280nm ilgio banga. Dirbama su didelio slėgio skystiniu chromatografu Waters (JAV).

Įsisavinant metodiką susidurta su eile sunkumų. Panaudota Bondapak C18 kolonėlė buvo nepakankamo selektyvumo (susiliejo tiamino ir kofeino pikai). Chromatografinių sąlygų (eliucijos greitis, gradiento programa) keitimas, vidinio standarto atsisakymas nedavė lauktų rezultatų. Problema buvo išspręsta panaudojus iš karto dvi kolonėles Bondapak C18 ir Vydac C18, Unisfer C18 kolonėlę.

Šiuo metu Jūs matote 52% šio straipsnio.
Matomi 390 žodžiai iš 755 žodžių.
Peržiūrėkite iki 100 straipsnių per 24 val. Pasirinkite apmokėjimo būdą:
El. bankininkyste - 1,45 Eur.
Įveskite savo el. paštą (juo išsiųsime atrakinimo kodą) ir spauskite Tęsti.
SMS žinute - 2,90 Eur.
Siųskite sms numeriu 1337 su tekstu INFO MEDIA ir įveskite gautą atrakinimo kodą.
Turite atrakinimo kodą?
Po mokėjimo iškart gausite atrakinimo kodą, kurį įveskite į laukelį žemiau:
Kodas suteikia galimybę atrakinti iki 100 straispnių svetainėje ir galioja 24 val.