Fermentų jonų mainų afininė chromatografija
5 (100%) 1 vote

Fermentų jonų mainų afininė chromatografija

TURINYS

1. Įvadas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2. Skysčių chromatografijos metodas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

2.1. Skysčių chromatografijos tipai. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

2.2. Jonų mainų chromatografija. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

2.3. Ekskliuzioninę chromatografija. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

2.4. Afininė arba biospecifinė chromatografija. . . . . . . . . . . . . . . . . 4

3. Fermentų išskyrimas ir valymas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

3.1. Darbo su fermentais bendri principai. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

3.2. Fermento ekstrakcija, valymas ir analizė. . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

4. Išvados. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

5. Literatūros sąrašas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

1. Įvadas.

Vienas iš aktualiausių dabartinės analizinės chemijos uždavinių yra naujų, efektyvesnių metodų taikymas, tam kad galima būtų analizuoti sudėtingų junginių bet kokios sudėties mišinius. Jei naudojami tik kai kurie metodai, nei viena laboratorija negalės atlikti didelio kiekio įvairiausių tyrimų.

Chromatografinė analizė – fiziko cheminis daugiakomponenčių sistemų atskyrimo ir analizės metodas remiasi selektyviu medžiagų molekulių ir jonų sugėrimu iš tirpalų bei dujų, naudojant kietus bei skystus sorbentus. Chromatografinė analizė remiasi sorbcijos reiškiniais (dujų ar ištirpusių medžiagų sugėrimas kietais ar skystais sorbentais, ”sorbio” lot. kalb. – sugerti, įtraukti). Chromatografiškai atskiriant ir analizuojant medžiagas naudojama adsorbcija, jonų mainai, mišinio komponentų perskirstymas tarp nesimaišančių skystų fazių, laipsninio nuosėdų susidarymo ir nevienodo jų tirpumo. Taip pat laipsninio kompleksinių junginių susidarymo ir įvairių kitų reiškinių, kurie sąlygoja įvairias chromatografijos rūšis.

Beveik visos cheminės reakcijos vyksta organizme, dalyvaujant biologiniams katalizatoriams. Jei ląstelėse šių katalizatorių nebūtų, tai cheminės reakcijos vyktų labai lėtai arba visai nevyktų. Dauguma biologinių katalizatorių yra baltymai, vadinami fermentais. Cheminės reakcijos, vykstančios organizme, greitis priklauso nuo fermento tipo ir jo savybių. Fermentų randama visų audinių ląstelėse. Jie specifiškai veikia biochemines medžiagų apykaitos reakcijas.

Fermentus galima analizuoti įvairių metodų pagalba. Labai efektyvūs dažniausiai taikomi metodai – skysčių chromatografija bei elektroforezė. Šiame darbe mes apibūdinsime labai efektyvių skysčių chromatografijos metodų (o būtent jonų mainų chromatografijos) taikymą fermentams atskirti ir aptikti.

2. Skysčių chromatografijos metodas.

Labai efektyvi skysčių chromatografija (LESC) – labiausiai perspektyvus skysčių chromatografijos metodas, plačiai naudojamas medicinoje ir biochemijos analizės metu. Metodas leidžia greitai atlikti analizę, yra tikslus ir jautrus. Perskyrimas įvyksta kai analizuojamo mišinio komponentai skirtingai reaguoja su nejudria chromatografinės kolonėles faze bei eliuentu. Kiekvieno junginio išeiga fiksuojama detektoriaus pagalba. LESC panaudojimas neleidžia junginiams suskilti analizės metu.

Jonų mainų chromatografija yra viena iš LESC modifikacijų, leidžia perskirti jonus, o ekskliuzioninė chromatografija – aukštos molekulinės masės junginius. Perskyrimo laipsnį nulemia sorbento selektyvumas ir sorbcijos laipsnis.

2.1. Skysčių chromatografijos tipai.

Skysčių chromatografija būna skysčių-adsorbcijos (junginiai atskiriami pagal jų savybę adsorbuotis ir desorbuotis adsorbento paviršiuje), skysčių-skysčių arba pasiskirstymo (atskyrimas vyksta dėl skirtingo tirpumo judrioje fazėje eliuente ir nejudrioje fazėje), jonų mainų chromatografija, kur atskyrimas įvyksta kai medžiagų joninės grupės grįžtamai reaguoja su sorbento (jonito) grupėmis. Jonų mainų chromatografija plačiai naudojama prieš-bakterinių vaistų gamyboje.

Jonų mainų chromatografijos pagrindas yra klasikinės jonų ekstrakcijos principas. Tam į judriąją fazę pridedama turinčio priešingą krūvį jono, kuris selektyviai sudaro kompleksus su analizuojama medžiaga. Tokios modifikacijos privalumai yra tame, kad kartu galima analizuoti rūgštinės, bazinės bei neutralios prigimties junginius.

Parenkant sąlygas būtina numatyti analizuojamos medžiagos molekulinę masę, jų poliškumą ir kitų junginių prigimtį. Jei analizuojamos medžiagos molekulės masė yra daugiau už 2000 s.v., dažniausiai naudoja ekskliuzioninę arba helio chromatografiją.

Medicinoje ir biochemijos analizėje dažniausiai naudoja ekskliuzioninę helio-chromatografiją. ir afininį (biospecifinį) metodus.

2.2. Jonų mainų chromatografija.

Įvairių fermentų mišinių analizė nėra labai sunki ir gali būti atliekama jonų mainų chromatografijos pagalba. Jonų mainų chromatografijos metodai naudojami gana senai, bet iki tam tikro laiko turėjo ribotą praktinį taikymą. Tai paaiškinama tuo, kad eliuentas juda nelabai greitai ir chromatografijos metu tam tikro komponento zona jonų mainų
kolonėlėje gali būti neryški. Pastaruoju metu jonų mainų chromatografija įgauna vis didesnę reikšmę. Nors šis terminas plačiai naudojamas, jis nėra labai patogus, nes apibūdina analizės objektą, bet neatitinka chromatografijos metodų klasifikacijai. Pagal šią klasifikaciją visi atskyrimai, kurie įvyksta jonų mainų chromatografijos metu yra būtent jonų chromatografija, esant naujoms proceso vykimo sąlygoms.

Jonų mainų chromatografijos esmė, t.y. grįžtami jonų mainai tarp nejudrios (joninės dervos, sorbentas) fazės ir skystos judrios fazės.

Šiuo metu Jūs matote 31% šio straipsnio.
Matomi 712 žodžiai iš 2323 žodžių.
Peržiūrėkite iki 100 straipsnių per 24 val. Pasirinkite apmokėjimo būdą:
El. bankininkyste - 1,45 Eur.
Įveskite savo el. paštą (juo išsiųsime atrakinimo kodą) ir spauskite Tęsti.
SMS žinute - 2,90 Eur.
Siųskite sms numeriu 1337 su tekstu INFO MEDIA ir įveskite gautą atrakinimo kodą.
Turite atrakinimo kodą?
Po mokėjimo iškart gausite atrakinimo kodą, kurį įveskite į laukelį žemiau:
Kodas suteikia galimybę atrakinti iki 100 straispnių svetainėje ir galioja 24 val.